Календарь статей
«    Декабрь 2017    »
ПнВтСрЧтПтСбВс
 123
45678910
11121314151617
18192021222324
25262728293031
Архив статей
Декабрь 2017 (12)
Ноябрь 2017 (2)
Октябрь 2017 (11)
Сентябрь 2017 (6)
Август 2017 (5)
Июль 2017 (4)


Яндекс.Метрика

Лабораторная оценка фунгицидов

Проводится на чистой культуре возбудителя, выращенного на жидкой среде Чапека.
Состав питательной среды Чапека:
сахароза — 30 г
натрий азотнокислый (NaNO3) — 2 г
калий фосфорнокислый однозамещенный (KH2PO4) — 1 г
магний сернокислый (MgSO4*7Н2 О) — 0,5 г
калий хлористыи (HCI) — 0,5 г
железо сернокислое (FeSO4) — 0,01 г
вода дистиллированная — 1 л
После растворения всех компонентов среду разливают в конические колбы емкостью 250 мл по 100 мл в каждую. Колбы закрывают ватными пробками, сверху покрывают бумагой и завязывают. Стерилизация проводится под давлением 0,5 атм. (112 °C) в течение 30 мин.
После стерилизации в питательную среду вносят мицелий гриба, заранее выращенный на стерильных семянках подсолнечника или овса. Перед стерилизацией семянки подсолнечника на сутки замачивают водой, затем наполняют конические колбы емкостью 0,5, 0,7 или 1 л, примерно наполовину и стерилизуют. Питательную среду из овса готовят несколько иначе. В конические колбы засыпают овес из расчета 100 г на колбу емкостью 0,5 л и 100 мл воды. Стерилизуют семянки подсолнечника или зерновки овса в автоклаве текучим паром дважды по 1 часу с разрывом в сутки.
Выращивается культура в термостате при температуре 22-24 °С. Спустя 3-4 дня колбы тщательно встряхивают для равномерного распределения наросшего мицелия гриба по питательному субстрату. Обычно на 10-12 день культура готова. В каждую колбу с жидкой питательной средой Чапека вносят по одной семянке под солнечника или зерновке овса с явно видимым мицелием исследуемого возбудителя. В течение 3-5 суток после внесения гриба среду выдерживают в термостате при температуре 22-24 °С, За это время вокруг места внесения заметно нарастание мицелия. Колбы, в которые попали другие виды грибов, или мицелии не дал прироста, выбраковываются. На 4-5 сутки в каждую колбу вносят препарат из расчета 10-20 мкг. Предварительно препарат растворяется в 1 мл стерилизованной воды или в растворителях диметилсульфооксида (ДМСО). Также можно использовать в качестве растворителей этанол или ацетон. Эти вещества при внесении в питательную среду в указанном количестве (1 мл) на рост возбудителя не влияют.
На оценку каждого препарата необходимо брать не менее 3-х колб. В качестве эталона используют фунгицид, рекомендованный для защиты подсолнечника от испытываемого патогена по 10 мкг на каждую колбу.
В контрольный вариант препарат не вносят. Затем колбы снова помещают в термостат. Учёт производят на 10-12 день после культивирования гриба вместе с препаратом.
Действие фунгицидов оценивается по четырёх балльной шкале:
1 балл — прирост мицелия равнозначен контролю:
2 балла — прирост мицелия в 2 раза меньше, чем в контроле;
3 балла — слабый прирост мицелия;
4 балла — отсутствует прирост мицелия
Для дальнейшего испытания препаратов в тепличных условиях отбирают те, которые получили оценку 3 и 4 балла.