Счетчики
Яндекс.Метрика

Питательные среды для патогенов болезней

Для идентификации патогенов отбираются образцы растении с симптомами болезней, определение которых в полевых условиях затруднено.
Лабораторные анализы начинаются с приготовления питательных сред.
Ввиду того, что питательных сред очень много, остановимся только на наиболее употребительных из них или дающих наибольшие возможности для развития и размножения гриба. Первым условием для среды является её питательность, потом подходящая реакция и абсолютная стерильность, достигаемая стерилизацией сред.
Наиболее часто употребляемые среды разделяются на:
а) твёрдые искусственно-созданные, как, например, агаровые и желатиновые.
б) твёрдые естественные: картофель, морковь,
в) жидкие искусственные: синтетические среды.
Ниже нами приводятся рецепты изготовления питательных сред.
Твёрдые искусственные среды. Наиболее употребительные агаровые среды изготовляются следующим образом. Нужное количество агар-агара за несколько часов до кипячения мелко измельчают и намачивают в колбе в половине нужного количества воды. Затем перед кипячением добавляют остальную воду и кипятят в водяной бане или автоклаве в течение 40 минул Небольшую часть жидкости из колбы немного охлаждают, тщательно размешивают с пептоном и выливают в колбу. То же делают и с мальц-экстрактом и затем в течение 10 минут смесь кипятят. После этого жидкость снимают с кипятильника, добавляют в неё лимонную кислоту, размешивают и разливают по пробиркам, в каждую пробирку 4 куб. см. Потом в этот день или на следующий стерилизуют в автоклаве текучим паром в течение 1 часа, начиная счёт с момента выхода из автоклава горячего пара, или в течение 10 минут под давлением одной атмосферы, если среды не кислые и без сахаров, в противном случае их доводят только до одной атмосферы. Агар-агар изготовляется из морских водорослей. Его реакция слабщелочная. Он состоит из смеси углеводов и небольшого количества азотистых веществ. Температура его плавления 100 °С.
Достоинства агаровых сред заключаются в том, что они не разжижаются до температуры 70-80 °С. Недостатки: плохая прилипаемость к стеклу и выделение воды; чтобы этого избежать, к агару прибавляют 2 % желатины. Агар в большинстве случаев не фильтруют; если же фильтрация необходима для просветления, она производится следующим образом: после кипячения в течение 40 минут в автоклаве, агар охлаждается до 55 °С, затем прибавляется белок яичный 1 на 500 куб. см, взбитый в небольшом количестве той же жидкости и медленно влитый в колбу. После этого производится фильтрация или в автоклаве при помощи воронки, положив в неё смоченный бумажный фильтр, или горячим фильтром.
СХЕМА ИЗГОТОВЛЕНИЯ АГАРОВЫХ СРЕД
1. Нарезание агар-агара.
2. Намачивание его за несколько часов до кипячения в половинном количестве воды.
3. Добавление остальной воды перед кипячением.
4. Стерилизация в течение 40 мин. текучим паром.
5. Добавление пептона и мальц-экстракта.
6. Кипячение в течение 10 минут.
7. Добавление лимонной кислоты.
8. Разливание по пробиркам.
9. Стерилизация текучим паром в течение одного часа или под давлением до одной атмосферы.
В такой же последовательности изготовляется и большинство питательных агаровых сред. Сахара и глицерин добавляются в агар перед разливанием его в пробирки.
Картофельный агар с глюкозой (по Щербакову).
20 г очищенного картофеля.
10 г глюкозы.
2 г агара.
100 куб. см воды.
Картофель нарезают ломтиками и заливают водой, стерилизуют 40 минут текучим паром, сливают и объем восстанавливают, кладут 2 г агара и 1 час стерилизуют текучим паром, потом добавляют 10 г глюкозы, разливают в пробирки и стерилизуют до одной атмосферы.
Употребляется для изучения окраски питательной среды, производимой грибами рода Fusarium.
Картофельный агар подкисленный (по Щербакову).
В ещё горячий картофельный агар, налитый в пробирки из расчёта 10 куб. см и уже простерилизованный, прибавляют 1-2 капли лимонной кислоты 50 % раствора, отдельно простерилизованной.
Употребляется при выделении Fusarium из материала, сильно загрязнённого бактериями и для изучения окраски среды.
Овсяный агар (по Щербакову).
10 г овса.
2 г агара.
100 куб. см воды.
В овёс наливают 100 куб. см воды, ставят в сушильный шкаф на 1 час при t 60 °С, отфильтровывают и восстанавливают прежний объём, затем прибавляют 2 г агара и стерилизуют 1 час текучим паром.
Для культивирования Fusarium.
Черносливовый агар.
5 г чернослива.
2 г агара.
100 куб. см воды.
Сливы заливают 100 куб. см воды и кипятят 1 час, затем фильтруют, прибавляют агар, снова кипятят 1 час, разливают по пробиркам и стерилизуют 2 раза с суточными промежутками каждый раз в течение 1 часа текучим паром.
Для культивирования Sclerotinia sclerotiorum.
Морковный агар
25 г моркови
2 г агара.
100 куб. см воды.
25 г моркови пропускают через тёрку, обливают 100 куб. см воды и ставят в автоклав на 1 час, затем фильтруют, восстанавливают объём, прибавляют 2 г агара и кипятят 1 час текучим паром. Для культивирования Aspergillus.
Пивное сусло с агаром.
Перед стерилизациеи неохмелённого сусла измеряют сахарометром процент сахара и добавляют воды настолько, чтобы процент сахара был от 5 до 10 (наиболее желательно 7 %). Затем стерилизуют текучим паром 1 час, фильтруют, добавляют 2 г агара и опять стерилизуют паром 1 час. Употребляется для культивирования большинства грибов, паразитирующих на подсолнечнике.