Календарь статей
«    Декабрь 2017    »
ПнВтСрЧтПтСбВс
 123
45678910
11121314151617
18192021222324
25262728293031
Архив статей
Декабрь 2017 (12)
Ноябрь 2017 (2)
Октябрь 2017 (11)
Сентябрь 2017 (6)
Август 2017 (5)
Июль 2017 (4)


Яндекс.Метрика

Питательные среды для патогенов болезней

Для идентификации патогенов отбираются образцы растении с симптомами болезней, определение которых в полевых условиях затруднено.
Лабораторные анализы начинаются с приготовления питательных сред.
Ввиду того, что питательных сред очень много, остановимся только на наиболее употребительных из них или дающих наибольшие возможности для развития и размножения гриба. Первым условием для среды является её питательность, потом подходящая реакция и абсолютная стерильность, достигаемая стерилизацией сред.
Наиболее часто употребляемые среды разделяются на:
а) твёрдые искусственно-созданные, как, например, агаровые и желатиновые.
б) твёрдые естественные: картофель, морковь,
в) жидкие искусственные: синтетические среды.
Ниже нами приводятся рецепты изготовления питательных сред.
Твёрдые искусственные среды. Наиболее употребительные агаровые среды изготовляются следующим образом. Нужное количество агар-агара за несколько часов до кипячения мелко измельчают и намачивают в колбе в половине нужного количества воды. Затем перед кипячением добавляют остальную воду и кипятят в водяной бане или автоклаве в течение 40 минул Небольшую часть жидкости из колбы немного охлаждают, тщательно размешивают с пептоном и выливают в колбу. То же делают и с мальц-экстрактом и затем в течение 10 минут смесь кипятят. После этого жидкость снимают с кипятильника, добавляют в неё лимонную кислоту, размешивают и разливают по пробиркам, в каждую пробирку 4 куб. см. Потом в этот день или на следующий стерилизуют в автоклаве текучим паром в течение 1 часа, начиная счёт с момента выхода из автоклава горячего пара, или в течение 10 минут под давлением одной атмосферы, если среды не кислые и без сахаров, в противном случае их доводят только до одной атмосферы. Агар-агар изготовляется из морских водорослей. Его реакция слабщелочная. Он состоит из смеси углеводов и небольшого количества азотистых веществ. Температура его плавления 100 °С.
Достоинства агаровых сред заключаются в том, что они не разжижаются до температуры 70-80 °С. Недостатки: плохая прилипаемость к стеклу и выделение воды; чтобы этого избежать, к агару прибавляют 2 % желатины. Агар в большинстве случаев не фильтруют; если же фильтрация необходима для просветления, она производится следующим образом: после кипячения в течение 40 минут в автоклаве, агар охлаждается до 55 °С, затем прибавляется белок яичный 1 на 500 куб. см, взбитый в небольшом количестве той же жидкости и медленно влитый в колбу. После этого производится фильтрация или в автоклаве при помощи воронки, положив в неё смоченный бумажный фильтр, или горячим фильтром.
СХЕМА ИЗГОТОВЛЕНИЯ АГАРОВЫХ СРЕД
1. Нарезание агар-агара.
2. Намачивание его за несколько часов до кипячения в половинном количестве воды.
3. Добавление остальной воды перед кипячением.
4. Стерилизация в течение 40 мин. текучим паром.
5. Добавление пептона и мальц-экстракта.
6. Кипячение в течение 10 минут.
7. Добавление лимонной кислоты.
8. Разливание по пробиркам.
9. Стерилизация текучим паром в течение одного часа или под давлением до одной атмосферы.
В такой же последовательности изготовляется и большинство питательных агаровых сред. Сахара и глицерин добавляются в агар перед разливанием его в пробирки.
Картофельный агар с глюкозой (по Щербакову).
20 г очищенного картофеля.
10 г глюкозы.
2 г агара.
100 куб. см воды.
Картофель нарезают ломтиками и заливают водой, стерилизуют 40 минут текучим паром, сливают и объем восстанавливают, кладут 2 г агара и 1 час стерилизуют текучим паром, потом добавляют 10 г глюкозы, разливают в пробирки и стерилизуют до одной атмосферы.
Употребляется для изучения окраски питательной среды, производимой грибами рода Fusarium.
Картофельный агар подкисленный (по Щербакову).
В ещё горячий картофельный агар, налитый в пробирки из расчёта 10 куб. см и уже простерилизованный, прибавляют 1-2 капли лимонной кислоты 50 % раствора, отдельно простерилизованной.
Употребляется при выделении Fusarium из материала, сильно загрязнённого бактериями и для изучения окраски среды.
Овсяный агар (по Щербакову).
10 г овса.
2 г агара.
100 куб. см воды.
В овёс наливают 100 куб. см воды, ставят в сушильный шкаф на 1 час при t 60 °С, отфильтровывают и восстанавливают прежний объём, затем прибавляют 2 г агара и стерилизуют 1 час текучим паром.
Для культивирования Fusarium.
Черносливовый агар.
5 г чернослива.
2 г агара.
100 куб. см воды.
Сливы заливают 100 куб. см воды и кипятят 1 час, затем фильтруют, прибавляют агар, снова кипятят 1 час, разливают по пробиркам и стерилизуют 2 раза с суточными промежутками каждый раз в течение 1 часа текучим паром.
Для культивирования Sclerotinia sclerotiorum.
Морковный агар
25 г моркови
2 г агара.
100 куб. см воды.
25 г моркови пропускают через тёрку, обливают 100 куб. см воды и ставят в автоклав на 1 час, затем фильтруют, восстанавливают объём, прибавляют 2 г агара и кипятят 1 час текучим паром. Для культивирования Aspergillus.
Пивное сусло с агаром.
Перед стерилизациеи неохмелённого сусла измеряют сахарометром процент сахара и добавляют воды настолько, чтобы процент сахара был от 5 до 10 (наиболее желательно 7 %). Затем стерилизуют текучим паром 1 час, фильтруют, добавляют 2 г агара и опять стерилизуют паром 1 час. Употребляется для культивирования большинства грибов, паразитирующих на подсолнечнике.